O jogo tem lugar no resort tropical da Ilha Delfino, que tem a forma de um golfinho e compreende dez localizações primárias. A ilha é habitada principalmente pelas raças Piantas e Nokis. Delfino Plaza é a capital da Ilha Delfino e hub principal do jogo. Mario estabelece para Isle Delfino para umas férias com a Princesa Peach, seu mordomo de longa data Toadsworth, e alguns outros sapos, esperando para umas férias relaxantes. Na chegada, eles descobrem que a ilha uma vez intocada foi poluída e rebocadas com graffiti. Como resultado dessa poluição, objetos em forma de sol chamados "Sprites Shine", fontes da ilha de poder, desapareceram, ea ilha é coberta por uma sombra perpétua. O culpado visto espalhar o grafite é disfarçado como Mario (referido como "Shadow Mario"). Mario é imediatamente preso como ele chega, falsamente acusado de vandalizar a ilha. Ele é levado a julgamento, considerado culpado e condenado a limpar as pichações e recuperar os Sprites Shine. Para ajudar com a limpeza, Mario encontra FLUDD, um poderoso canhão de água que é toted como uma mochila. Mario sai em uma aventura para limpar seu nome e encontrar o verdadeiro criminoso, ao restaurar a tranquilidade ea ordem para Ilha Delfino.
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